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The Arhgef7 expression vectors were generated from mKIAA0142 (corresponding to NM_001113517.1) by amplifying the coding sequence by PCR and cloning it into the pEGFP-C1 (Clontech) or pcDNA3.1-HA (Invitrogen) vectors. The sequences encoding the different Arhgef7 domains were amplified by PCR and cloned into the pEGFP-C2 vector. The vectors for Cdc42 F28L and pGST-PBD have been described previously 7,8,54 . The coding sequence for mouse TC10 was amplified by PCR and cloned into pGEX4-T2 and pEGFP-N1. Confira todas jogos de tabuleiro e jogos de cassino relação as regras da oferta no site. To generate an shRNA vector directed against Arhgef7 (Arhgef7 RNAi) an shRNA with the target sequence 5′-AGGGAGTGAG GGAGAGAACG-3′ was cloned into the Xho I and Eco RI sites of the pCAGGS-U6 vector 71 . An RNAi-resistant Arhgef7 vector was created by introducing 2 synonymous mutations into the binding site for the shRNA in Arhgef7 (Arhgef7-res) by site directed mutagenesis using the QuikChange Site-Directed Mutagenesis kit (Stratagene) according to the manufacturer’s instructions with the primers 5′-GGTTTCATCT ATCAGGGAAA GCTGCCGACA ACGGGAATG-3′ and 5′-TGTGATTGTC ATTCCCGTTG TCGGCAGCTT TCCCTGATA-3′. Dissociated cortical and hippocampal neurons from embryonic day 18 (E18) rat or E17 mouse embryos were prepared and transfected by calcium phosphate co-precipitation as described previously 5,71 . Neurons were plated at 70,000 cells per well in a 24-well plate coated with poly-L ornithine in Neurobasal medium (Life Technologies) and cultured at 37 °C and 5% CO 2 . Patrocinador master do fluminense.AQUECIMENTO (1) CAMISA I (7) GOLEIRO (2) UNIFORME DE JOGO (4) SHORTS (1) INFANTIL (2) CAMISA I (5) LANÇAMENTO (17) TREINO E VIAGEM 2023 (8) 47 produtos encontrados.
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